Javascript è attualmente disabilitato nel tuo browser.Diverse funzionalità di questo sito non funzioneranno mentre javascript è disabilitato.accesso aperto alla ricerca scientifica e medicaDalla presentazione alla prima decisione editoriale.Dall'accettazione editoriale alla pubblicazione.La suddetta percentuale di manoscritti è stata respinta negli ultimi 12 mesi.Riviste scientifiche e mediche peer-reviewed ad accesso libero.Dove Medical Press è membro dell'OAI.Ristampe in blocco per l'industria farmaceutica.Offriamo vantaggi reali ai nostri autori, inclusa l'elaborazione accelerata degli articoli.Registra i tuoi dettagli specifici e farmaci specifici di interesse e abbineremo le informazioni fornite agli articoli dal nostro ampio database e ti invieremo prontamente copie PDF via e-mail.Torna a Diari » Progettazione, sviluppo e terapia di farmaci » Volume 16Autori Senousy SR, Ahmed ASF, Abdelhafeez DA, Khalifa MMA, Abourehab MAS, El-Daly MPubblicato l'8 settembre 2022 Volume 2022:16 Pagine 3023—3039DOI https://doi.org/10.2147/DDDT.S370460Revisione tramite revisione tra pari anonima singolaEditore che ha approvato la pubblicazione: Dr Tuo DengShaymaa Ramzy Senousy,1 Al-Shaimaa F Ahmed,1 Dalia A Abdelhafeez,2 Mohamed Montaser A Khalifa,1 Mohammed AS Abourehab,3 Mahmoud El-Daly1 1Dipartimento di Farmacologia e Tossicologia, Facoltà di Farmacia, Minia University, Minia, 61519, Egitto ;2Dipartimento di Patologia, Facoltà di Medicina, Università di Minia, Minia, Egitto;3Dipartimento di Farmaceutica, Facoltà di Farmacia, Università Umm Al-Qura, Mecca, 21955, Arabia Saudita Corrispondenza: Al-Shaimaa F Ahmed, Dipartimento di Farmacologia e Tossicologia, Facoltà di Farmacia, Minia University, Minia, Egitto, Tel +20 1020018842, Email [email protected] Abstract: L'infiammazione e lo stress ossidativo svolgono un ruolo importante nello sviluppo della sepsi e delle complicazioni associate, portando a insufficienza multiorgano e morte.I polmoni, il fegato e i reni sono tra i primi organi colpiti correlati alla mortalità nella sepsi.L'alfa-chimotripsina (α-ch) è una serina proteasi che esercita proprietà antinfiammatorie, antiedematose e antiossidanti.Scopo: questo studio è stato intrapreso per chiarire se gli effetti antinfiammatori e antiossidanti di α-ch osservati in studi precedenti possono alleviare lesioni polmonari, epatiche e renali in un modello di sepsi indotta da legatura e puntura cecale (CLP) e quindi diminuire la mortalità.Materiali e metodi: agli animali settici è stata somministrata la procedura α-ch 2 h dopo la procedura CLP.Gli esiti della sepsi sono stati valutati nei polmoni, nel fegato e nei reni.Gruppi di animali separati sono stati studiati per uno studio di sopravvivenza.Risultati: il CLP ha portato a una sopravvivenza dello 0%, mentre il post-trattamento con α-chimotripsina ha portato a una sopravvivenza del 50% alla fine dello studio.La somministrazione di α-chimotripsina ha determinato una significativa attenuazione dei livelli elevati di malonaldeide (MDA) e nitriti/nitrati totali (NOx) indotti dalla sepsi.Inoltre, si è verificato un aumento significativo del contenuto ridotto di glutatione (GSH) e dell'attività della superossido dismutasi (SOD) nei polmoni, nel fegato e nei reni.La somministrazione di α-ch ha ridotto l'elevata espressione tissutale del recettore toll-like-4 (TLR4), del fattore nucleare kappa-B (NF-κB), della mieloperossidasi (MPO) e dell'ossido nitrico sintasi inducibile (iNOS).L'alfa-chimotripsina ha determinato una significativa riduzione dei livelli sierici di fattore di necrosi tumorale-alfa (TNF-α), interleuchina-1 beta (IL-1β) e interleuchina-6 (IL-6).L'alfa-chimotripsina ha attenuato l'aumento dei livelli sierici di creatinina, cistatina C, azoto ureico (BUN), alanina aminotransferasi (ALT) e aspartato aminotransferasi (AST) che è stato osservato nel gruppo settico.Inoltre, α-ch ha ridotto significativamente il rapporto peso umido/secco polmonare, il contenuto proteico totale e la conta leucocitaria nel liquido di lavaggio broncoalveolare (BALF).L'esame istopatologico di polmoni, fegato e reni ha confermato gli effetti protettivi di α-ch su quegli organi.Conclusione: α-ch ha un potenziale protettivo contro la sepsi attraverso la riduzione dell'espressione tissutale di TLR4, NF-κB, MPO e iNOS che porta a una diminuzione dello stress ossidativo e dei segnali infiammatori indotti dalla sepsi.Questo effetto sembrava alleviare il danno ai polmoni, al fegato e ai reni e aumentare la sopravvivenza nei ratti soggetti a sepsi.Parole chiave: sepsi, CLP, TNF-α, citochine, ROS, TLR-4, iNOSLa sepsi, una complicanza critica osservata comunemente nei pazienti post-operatori, è causata da un'infezione che provoca una sindrome da risposta infiammatoria sistemica e termina con una disfunzione multiorgano.1,2 È una delle principali cause di morbilità e mortalità nei pazienti in terapia intensiva .Il tasso di mortalità associato allo shock settico è elevato (tra il 25% e il 52%), causando un problema clinico globale.3 Le lesioni polmonari, epatiche e renali associate alla sepsi sono una causa sostanziale di morte.4Sebbene la sindrome da distress respiratorio acuto (ARDS) associata alla sepsi non sia ancora completamente compresa, alcuni studi hanno chiarito che le citochine proinfiammatorie, come il fattore di necrosi tumorale-α (TNF-α) o l'interleuchina-1β (IL-1β), attivano la barriera alveolare lesioni, formazione di trappole extracellulari di neutrofili e attivazione piastrinica con formazione di microtrombi.Ciò si traduce in un alterato scambio gassoso, grave ipossiemia e ipercapnia.5 I reni, attraverso la regolazione dei fluidi e della pressione sanguigna, hanno un ruolo fondamentale nella perfusione degli organi e nella circolazione generale.6 L'esatto meccanismo alla base del danno renale acuto ( AKI) associato alla sepsi non è ancora completamente compreso.Tuttavia, ci si aspettava che i segnali infiammatori, tra cui stress ossidativo, danno da ischemia-riperfusione, apoptosi tubulare e microcircolazione locale, fossero il meccanismo causale della necrosi tubulare acuta.7 Nella sepsi, si ipotizza che gli epatociti svolgano un ruolo cruciale attraverso il rilascio di proteine ​​di fase nella circolazione sistemica, svolgendo quindi un ruolo regolatore nell'eccessiva infiammazione o immunosoppressione.8 Il danno epatico associato alla sepsi è dovuto a due complicazioni principali: epatite ipossica e colestasi.L'epatite ipossica deriva da alterazioni emodinamiche, formazione di microtrombi, disfunzione dell'endotelio e ostruzione sinusoidale.La colestasi indotta da sepsi deriva dalla ridotta formazione della bile e dal suo flusso alterato.9Nonostante le linee guida delineate per la gestione della sepsi e i progressi nei trattamenti, il tasso di mortalità per i pazienti settici con danno polmonare acuto (ALI), danno epatico acuto (AHI) e danno renale acuto (AKI) è ancora del 70% .Pertanto, la definizione di approcci terapeutici e preventivi nuovi, sicuri ed efficaci è fondamentale per gestire con successo la sepsi e ridurne le complicanze.Durante la sepsi si manifestano due fasi emodinamiche, che possono sovrapporsi tra loro: una fase iperdinamica e una ipodinamica.Nella prima fase vengono rilasciate citochine pro-infiammatorie, come TNF-α, IL-1 e IL-6 e specie reattive dell'ossigeno (ROS), come anioni superossido e ossido nitrico.Questa fase è la causa principale dell'elevata mortalità associata alla sepsi, che è correlata a lesioni multiple d'organo.10-12 Per terminare la risposta infiammatoria dopo che l'infezione è stata controllata, le citochine antinfiammatorie come IL-10 vengono rilasciate nel seconda fase.13 Tale fase, anche se andata incontrollata, può comportare una grave soppressione del sistema immunitario, che rende il paziente più suscettibile alle infezioni secondarie.14 Un'infezione secondaria porta a ripetuti episodi di fasi iper e ipoinfiammatorie che peggiorano le complicanze della sepsi.15 Il legame del lipopolisaccaride (LPS) al recettore toll-like-4 (TLR4) e la successiva traslocazione del fattore nucleare kappa-B (NF-κB) nel nucleo e l'aumento della trascrizione dell'ossido nitrico sintasi inducibile ( iNOS) provoca un'eccessiva produzione di ossido nitrico (NO).L'interazione di NO con i radicali superossido forma perossinitrito che danneggia in modo massiccio le funzioni delle cellule normali.1 Mirare a questa via di segnalazione e ridurre lo stress ossidativo indotto durante la sepsi può a sua volta diminuire la disfunzione di più organi e quindi diminuire la mortalità.Inoltre, la mieloperossidasi (MPO) dei neutrofili attivati ​​produce acido ipocloroso che interagisce con l'anione superossido, causando danni diretti alle cellule ospiti.16,17Le serina proteasi sono membri della famiglia delle proteasi e vengono rilasciate da cellule infiammatorie, come i neutrofili.18 L'alfa-chimotripsina (α-ch) è una serina proteasi che viene rilasciata dopo la sua scissione dal chimotripsinogeno nell'intestino.α-ch esercita potenti effetti antinfiammatori che accelerano il riassorbimento di edema infiammatorio, ematoma o edema, a seguito di un'operazione o di un trauma.Durante i processi infiammatori subacuti o cronici, la chimotripsina esercita proprietà proteolitiche che dissolvono le formazioni fibrinose.19 In vitro, lo stato infiammatorio dei neutrofili è stato soppresso dalla chimotripsina.20 Un altro studio ha rivelato che l'edema pleurico era sostanzialmente ridotto al minimo nei ratti trattati con chimotripsina.21 Basso- dosi di chimotripsina si sono rivelate efficaci nell'inibire la migrazione dei neutrofili nei focolai infiammatori in vivo.22 Inoltre, sia nei modelli acuti che subacuti di infiammazione della zampa posteriore nei ratti, la chimotripsina ha dimostrato attività antinfiammatoria.23 Inoltre, in uno studio per chiarire l'anti- proprietà ossidanti della chimotripsina, si è scoperto che agisce indirettamente attraverso la riduzione dei prodotti di perossidazione lipidica, nonché attraverso il mantenimento della superossido dismutasi (SOD), catalasi, glutatione perossidasi e glutatione-S-transferasi.24A causa delle sue diverse attività biologiche, inclusi i suoi effetti antiedematosi, antinfiammatori, antiossidanti, antinfettivi e fibrinolitici, la chimotripsina è stata ampiamente utilizzata per accelerare la riparazione di lesioni traumatiche e ustioni, nonché per alleviare la sciatica .25 Inoltre, è stato utilizzato per gestire le condizioni delle vie respiratorie superiori e le malattie polmonari croniche.26Alla luce degli studi precedenti, abbiamo esplorato i potenziali effetti benefici di α-ch in un modello di sepsi sperimentale ben consolidato nei ratti indotti da legatura e puntura cecale (CLP).Questo modello è considerato un modello standard per l'induzione della sepsi poiché imita i percorsi coinvolti nella sepsi negli esseri umani.27,28 Abbiamo studiato se α-ch può alleviare ALI, AHI e AKI indotti da CLP, dato il suo antinfiammatorio e gli effetti antiossidanti che sono stati precedentemente descritti e se un tale miglioramento potrebbe aumentare la sopravvivenza nei ratti settici.Ratti Wistar albini femmine (200 ± 20 g) sono stati acquistati dalla Nahda University a Beni Suef (NUB) Animal House (Beni Suef, Egitto).I ratti sono stati tenuti a temperatura ambiente (25 ± 2 ◦C) in gabbie di plastica e sotto un ciclo di luce-oscurità di 12 ore.Prima che l'esperimento fosse condotto, tutti i ratti sono stati sistemati in condizioni di laboratorio per almeno una settimana.Tutti i ratti sono stati mantenuti nelle stesse condizioni durante l'esperimento.Dieta e acqua erano permesse ad libitum.Tutte le procedure dell'esperimento sono state condotte secondo le linee guida etiche internazionali e la Guida degli Istituti Sanitari Nazionali sulla cura e l'uso degli animali da laboratorio e sono state approvate dalla Commissione per l'etica della ricerca scientifica, Facoltà di Farmacia, Università di Minia (Codice numero del progetto: ES12/2020).L'alfa-chimotripsina è stata ottenuta dall'αchimotripsina (Amoun Pharmaceutical Company SAE, Egitto).Ventiquattro ratti sono stati assegnati in modo casuale a tre gruppi, come segue: Gruppo 1: (n = 6) operato in modo simulato (gruppo simulato);Gruppo 2: (n = 12) animali settici (gruppo CLP);Gruppo 3: (n = 6) ratti CLP che hanno ricevuto α-ch (8,1 unità/ratto, im, dose singola, 2 ore dopo chirurgia CLP).29La sepsi polimicrobica è stata indotta chirurgicamente dall'operazione CLP, come descritto in precedenza.30,31 È stato eseguito un modello grave attraverso la legatura di oltre il 75% del cieco (quasi al di sotto della valvola ileo-cecale) e perforando due volte con un ago calibro 18 .A parte la legatura e la puntura del cieco, tutti gli animali operati con la simulazione hanno seguito gli stessi passaggi.In un altro esperimento, trenta ratti (stesso peso e sesso dell'esperimento precedente) sono stati assegnati in modo casuale a tre gruppi, dieci ratti ciascuno, come segue: gruppo operato con simulazione, gruppo non trattato settico (gruppo CLP) e gruppo trattato con α-ch gruppo settico.A tutti i topi è stato concesso libero accesso all'acqua e al cibo.La mortalità dei ratti è stata monitorata quotidianamente per 7 giorni.32Ventiquattro ore dopo l'induzione del CLP, i campioni di sangue sono stati raccolti mediante puntura cardiaca dopo aver indotto l'anestesia utilizzando sodio tiopentale (50 mg/kg).I campioni di siero sono stati raccolti dopo centrifugazione per 10 minuti a 2500 rpm.Il liquido di lavaggio broncoalveolare (BALF) è stato ottenuto intubando i polmoni e lavandoli con soluzione salina tampone fosfato fredda (PBS).33 I polmoni sono stati accuratamente sezionati, lavati e divisi come segue: il lobo superiore destro è stato utilizzato per la misurazione del polmone umido/ peso secco, il lobo inferiore del polmone destro è stato conservato per l'esame istopatologico,34 e il polmone sinistro è stato omogeneizzato per ulteriori misurazioni.Un segmento del lobo mediale del fegato e del rene sinistro di ciascun animale è stato rapidamente sezionato, asciugato su carta da filtro, pesato ed elaborato per l'esame istopatologico.Gli altri campioni di rene e fegato sono stati congelati in azoto liquido e conservati a -80°C.35Prima dell'analisi, i tessuti polmonari, epatici e renali sono stati posti in PBS per preparare un omogeneizzato al 5% W/V.Gli omogenati sono stati centrifugati per 15 minuti a 4000 rpm e il surnatante è stato separato per varie analisi.I campioni sono stati fissati in una soluzione di formalina tamponata neutra (10%).La colorazione standard di ematossilina ed eosina (H&E) è stata eseguita dopo l'elaborazione dei tessuti del polmone, del rene e del fegato.I vetrini sono stati esaminati utilizzando un microscopio ottico.La valutazione microscopica è stata effettuata da un patologo cieco ai gruppi sperimentali.Infiltrazione di cellule infiammatorie, emorragia, congestione ed edema sono state valutate nei tessuti polmonari e hanno ottenuto un punteggio da 1 a 4 come segue: 0, assente;1, luce;2, moderato;3, forte;e 4, intenso.Il punteggio del danno polmonare è stato calcolato come media dei punteggi dei singoli parametri.La percentuale di tubuli che presentano necrosi cellulare è stata utilizzata per la valutazione del punteggio di danno renale come segue: 0 = nessuno, 1 = <20%, 2 = >20% e <50%, 3 = >50% e <70% , 4 = >70%.Almeno dieci campi sono stati esaminati per ogni animale.31I seguenti quattro criteri sono stati utilizzati per valutare il danno epatico: congestione, edema, infiltrazione di leucociti e monociti polimorfonucleati e necrosi su una scala da 0 a 4 come segue: 1 = congestione, 2 = edema, 3 = infiltrazione di leucociti e monociti polimorfonucleati , 4 = necrosi.Il punteggio totale è calcolato sulla base della somma dei punteggi assegnati per i singoli parametri.36L'edema polmonare è stato valutato utilizzando il rapporto peso W/D del polmone.34 Il lobo polmonare superiore destro è stato posto in un forno a 80°C per 24 ore.È stato pesato utilizzando una bilancia elettrica sensibile (bilancia analitica 220/C/2, RADWAG, Polonia) prima (peso umido) e dopo (peso secco) il suo inserimento nel forno.Il fluido di lavaggio broncoalveolare (BALF) è stato centrifugato a 1000 rpm per 10 minuti a 4°C.La conta cellulare totale è stata ottenuta dopo la risospensione del pellet cellulare in 0,5 ml di PBS utilizzando l'analizzatore ematologico automatico Mindray Bc-20s.37La concentrazione proteica totale nel supernatante del BALF è stata determinata colorimetricamente, seguendo la procedura di George e Kingsley,38 secondo le raccomandazioni del produttore (kit BioMed, Egitto).I livelli di creatinina sierica (CR), azoto ureico (BUN), alanina aminotransferasi (ALT) e aspartato aminotransferasi (AST) sono stati valutati come descritto in precedenza,39,40,42 utilizzando kit disponibili in commercio (Biodiagnostic, Egitto).La riduzione del glutatione (GSH) negli omogenati di polmoni, fegato e reni è stata misurata colorimetricamente a 412 nm seguendo la metodologia precedentemente descritta.41 L'attività della superossido dismutasi (SOD) è stata determinata spettrofotometricamente in tutti gli omogenati di tessuto con il metodo descritto da Marklund e Marklund.42Dopo la riduzione dei nitrati a nitriti da parte del cadmio, la reazione di Griess è stata utilizzata per determinare il contenuto totale di nitrati in modo colorimetrico.43 La concentrazione di malondialdeide (MDA) è stata valutata colorimetricamente in tutti gli omogenati di tessuto seguendo un metodo precedentemente descritto.44Le citochine infiammatorie sieriche e la cistatina C sono state misurate utilizzando kit ELISA disponibili in commercio (Elabscience Biotechnology, Houston, Texas, USA).Le curve standard sono state stabilite utilizzando proteine ​​standard di riferimento.Le concentrazioni sieriche sono state determinate spettrofotometricamente a 450 nm.Le sezioni di tessuto (5 um) sono state immunocolorate per il recettore Toll-like-4 (TLR4) (anticorpo policlonale di coniglio, n. di catalogo GB11186, Servicebio, Wuhan, Cina), fattore nucleare-kappaB (NF-κB) (monoclonale di coniglio anticorpo, n. di catalogo A19653, tecnologia ABclonale, Woburn, Massachusetts, USA), mieloperossidasi (MPO) (anticorpo policlonale di coniglio, n. di catalogo RB-373-A, Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, USA) e ossido nitrico inducibile sintasi (iNOS) (anticorpo policlonale di coniglio, n. di catalogo GB11119, Servicebio, Wuhan, Cina), secondo le linee guida del produttore.Il metodo enzimatico descritto da Nakane e Pierce Jr45 è stato utilizzato per rilevare l'espressione.L'ematossilina è stata usata come controcolorante.L'analisi statistica dei dati è stata eseguita utilizzando GraphPad Prism (versione 7.0; San Diego, CA, USA).Il test Shapiro-Wilk è stato utilizzato per determinare la normalità dei dati.I risultati sono stati normalizzati alla media del gruppo sham.Il test di analisi della varianza (ANOVA) è stato utilizzato per verificare la significatività dei risultati.Il test post-hoc di Tukey è stato utilizzato per confronti multipli.Il test Log-rank (Mantel-Cox) è stato utilizzato per l'analisi dei dati di sopravvivenza.Se i valori p erano <0,05, le differenze erano considerate statisticamente significative.L'analisi di sopravvivenza ha rivelato una differenza significativa (p <0,05) nella sopravvivenza tra il gruppo sham e il gruppo CLP, nonché tra il gruppo trattato con α-ch e il gruppo settico non trattato (Figura 1A).Nessun ratto è sopravvissuto oltre la fine delle prime 48 h nel gruppo CLP.È interessante notare che la somministrazione di α-ch 2 h post-CLP ha ridotto significativamente la mortalità e ha determinato una sopravvivenza del 100%, 90% e 50% dopo il primo, secondo e settimo giorno, rispettivamente, nel gruppo trattato.Figura 1 Effetto del trattamento con alfa-chimotripsina sulla sopravvivenza, sui segnali infiammatori sierici e sullo stress ossidativo dei tessuti.(A) La somministrazione del trattamento con α-ch (8,1 unità/ratto, im, dose singola) 2 h dopo CLP ha migliorato notevolmente la sopravvivenza a 7 giorni dei ratti settici del 50% rispetto al gruppo settico non trattato (n = 10 ratti per gruppo ).(B) Grafici a barre che mostrano l'effetto di CLP e α-ch sul siero TNF-α, IL-1β e IL-6.(C) Vengono mostrati l'attività SOD polmonare, i livelli di GSH, MDA e NOx.(D) Attività epatica SOD, livelli di GSH, MDA e NOx.(E) Attività renale SOD, livelli di GSH, MDA e NOx.I dati sono stati normalizzati alla media del gruppo Sham.I dati sono stati analizzati con ANOVA unidirezionale seguito dal test di Tukey per confronti multipli, n = 6 per tutti i gruppi.#Denota una differenza significativa rispetto a sham (p < 0,05).*Significativamente diverso da CLP (p < 0,05).Abbreviazioni: CLP, Legatura cecale e puntura;α-ch, alfa-chimotripsina.Figura 1 Effetto del trattamento con alfa-chimotripsina sulla sopravvivenza, sui segnali infiammatori sierici e sullo stress ossidativo dei tessuti.(A) La somministrazione del trattamento con α-ch (8,1 unità/ratto, im, dose singola) 2 h dopo CLP ha migliorato notevolmente la sopravvivenza a 7 giorni dei ratti settici del 50% rispetto al gruppo settico non trattato (n = 10 ratti per gruppo ).(B) Grafici a barre che mostrano l'effetto di CLP e α-ch sul siero TNF-α, IL-1β e IL-6.(C) Vengono mostrati l'attività SOD polmonare, i livelli di GSH, MDA e NOx.(D) Attività epatica SOD, livelli di GSH, MDA e NOx.(E) Attività renale SOD, livelli di GSH, MDA e NOx.I dati sono stati normalizzati alla media del gruppo Sham.I dati sono stati analizzati con ANOVA unidirezionale seguito dal test di Tukey per confronti multipli, n = 6 per tutti i gruppi.#Denota una differenza significativa rispetto a sham (p < 0,05).*Significativamente diverso da CLP (p < 0,05).Abbreviazioni: CLP, Legatura cecale e puntura;α-ch, alfa-chimotripsina.L'induzione della sepsi ha causato un aumento significativo (p <0,05) dei livelli sierici di TNF-α, IL-1β e IL-6 rispetto ai ratti operati con la simulazione.La somministrazione di una singola dose di chirurgia post-CLP α-ch 2 h ha ridotto significativamente (p <0,05) i livelli sierici di TNF-α, IL-1β e IL-6 rispetto al gruppo CLP (Figura 1B).L'induzione della sepsi ha comportato una diminuzione significativa (p <0,05) dell'attività SOD e del contenuto di GSH nei tessuti polmonari, epatici e renali rispetto al gruppo sham.Il trattamento con α-ch 2 ore dopo CLP ha comportato un aumento significativo (p <0,05) dell'attività di GSH e SOD in tutti i tessuti esaminati (Figura 1C-E).L'induzione della sepsi ha portato a un aumento significativo (p <0,05) nella MDA tissutale, come indicatore delle sostanze reattive all'acido tiobarbiturico (TBARS), rispetto ai ratti operati con la simulazione.La somministrazione di α-ch 2 h dopo CLP ha ridotto significativamente (p <0,05) il TBARS elevato nei tessuti polmonari, epatici e renali settici.Cambiamenti simili sono stati osservati nei livelli di nitrati, come mostrato nella Figura 2A-C.Figura 2 Effetto protettivo dell'alfa-chimotripsina contro l'ALI indotta da sepsi.Grafici a barre che mostrano l'effetto di CLP e α-ch su (A) rapporto peso W/D del tessuto polmonare, (B) numero totale di leucociti in BALF e (C) contenuto proteico totale in BALF.(D) Analisi del punteggio del danno polmonare.I dati sono stati normalizzati alla media del gruppo Sham.I dati sono stati analizzati con ANOVA unidirezionale seguito dal test di Tukey per confronti multipli, n = 6 per tutti i gruppi.#Significativamente diverso da sham (p < 0,05).*Significativamente diverso rispetto al CLP (p<0,05).(E) Il trattamento con α-ch riduce le lesioni istopatologiche indotte dalla sepsi nei polmoni di ratto (colorazione H&E, ingrandimento originale × 200 per i, ii e iii e × 400 per iv, v e vi).Il gruppo fittizio non ha mostrato segni di infortunio.Nel gruppo CLP, infiltrato infiammatorio ed edema hanno causato un ispessimento della membrana alveolare (freccia bianca).Le aree focali del danno della membrana alveolare hanno provocato spazi alveolari dilatati congestionati (punta di freccia) e aree di infiltrati infiammatori (macrofagi alveolari e linfociti) e congestione del tessuto interstiziale (freccia nera).L'effetto protettivo di α-ch era evidente sotto forma di membrana alveolare intatta degli alveoli multipli (freccia), spazio alveolare vuoto e assenza di segni di edema o emorragia (punta di freccia).Abbreviazioni: CLP, Legatura cecale e puntura;α-ch, alfa-chimotripsina.Figura 2 Effetto protettivo dell'alfa-chimotripsina contro l'ALI indotta da sepsi.Grafici a barre che mostrano l'effetto di CLP e α-ch su (A) rapporto peso W/D del tessuto polmonare, (B) numero totale di leucociti in BALF e (C) contenuto proteico totale in BALF.(D) Analisi del punteggio del danno polmonare.I dati sono stati normalizzati alla media del gruppo Sham.I dati sono stati analizzati con ANOVA unidirezionale seguito dal test di Tukey per confronti multipli, n = 6 per tutti i gruppi.#Significativamente diverso da sham (p < 0,05).*Significativamente diverso rispetto al CLP (p<0,05).(E) Il trattamento con α-ch riduce le lesioni istopatologiche indotte dalla sepsi nei polmoni di ratto (colorazione H&E, ingrandimento originale × 200 per i, ii e iii e × 400 per iv, v e vi).Il gruppo fittizio non ha mostrato segni di infortunio.Nel gruppo CLP, infiltrato infiammatorio ed edema hanno causato un ispessimento della membrana alveolare (freccia bianca).Le aree focali del danno della membrana alveolare hanno provocato spazi alveolari dilatati congestionati (punta di freccia) e aree di infiltrati infiammatori (macrofagi alveolari e linfociti) e congestione del tessuto interstiziale (freccia nera).L'effetto protettivo di α-ch era evidente sotto forma di membrana alveolare intatta degli alveoli multipli (freccia), spazio alveolare vuoto e assenza di segni di edema o emorragia (punta di freccia).Abbreviazioni: CLP, Legatura cecale e puntura;α-ch, alfa-chimotripsina.Il rapporto peso umido/secco, la conta leucocitica, il contenuto proteico totale in BALF e i punteggi di danno polmonare sono aumentati significativamente (p <0,05) nei ratti CLP rispetto ai ratti sham.La somministrazione di α-ch ha migliorato tali osservazioni (Figura 2A-D).La Figura 2 mostra le sezioni polmonari colorate con H&E e i punteggi istopatologici dei tessuti polmonari.Il gruppo sham-operato ha mostrato alveoli normali con membrane alveolari intatte.Il gruppo CLP ha mostrato membrane alveolari ispessite a causa di edema e infiltrato infiammatorio.Le sezioni del gruppo sham hanno mostrato spazi alveolari normali con bronchioli intermedi.Nel frattempo, nel gruppo CLP erano evidenti spazi alveolari congestionati e dilatati.Inoltre, nel gruppo CLP sono state osservate congestione del tessuto interstiziale, aree di infiltrati infiammatori (macrofagi alveolari e linfociti) e aree focali di danno alla membrana alveolare.Dopo la somministrazione di α-ch, sono state osservate membrana alveolare intatta e spazi alveolari non congestionati.È stata anche notata l'assenza di segni di rottura, emorragia, edema e infiltrati infiammatori (Figura 2E).Questi risultati suggeriscono un effetto protettivo potenzialmente notevole.I livelli di alanina aminotransferasi (ALT), aspartato aminotransferasi (AST) e punteggi di danno epatico sono aumentati notevolmente dopo l'induzione della sepsi.L'iniezione di α-ch ha ridotto tali livelli e punteggi (Figura 3A-C).Figura 3 Effetto protettivo dell'alfa-chimotripsina contro l'AHI indotta dalla sepsi.Grafici a barre che mostrano l'effetto di CLP e α-ch su (A) siero ALT, (B) siero AST e (C) analisi del punteggio di danno epatico.I dati sono stati normalizzati alla media del gruppo Sham.I dati sono stati analizzati con ANOVA unidirezionale seguito dal test di Tukey per confronti multipli, n = 6 per tutti i gruppi.#Significativamente diverso rispetto a sham (p < 0,05).*Significativamente diverso rispetto a CLP (p < 0,05).(D) Il trattamento con α-ch ha ridotto le lesioni istopatologiche indotte dalla sepsi nel fegato di ratto (colorazione H&E, ingrandimento originale × 200 per i, ii e iii e × 400 per iv, v e vi).Il gruppo fittizio non ha mostrato segni di infortunio.Il gruppo CLP ha mostrato una degenerazione vacuolare da lieve a moderata (freccia bianca) e sinusoidi epatici congestionati e dilatati (punta di freccia bianca).Sono mostrati il ​​nucleo di forma triangolare o ovale di prominente cellula di Kupffer (freccia nera) e gruppi di linfociti e macrofagi (infiltrati) (punta di freccia nera).L'effetto protettivo di α-ch era evidente sotto forma di vena centrale non congestionata con corde epatocitarie disposte perifericamente (freccia).Sono stati osservati anche spazi sinusoidali non congestionati con regioni focali non necrotiche o infiltrati infiammatori (punta di freccia).Abbreviazioni: CLP, Legatura cecale e puntura;α-ch, alfa-chimotripsina.Figura 3 Effetto protettivo dell'alfa-chimotripsina contro l'AHI indotta dalla sepsi.Grafici a barre che mostrano l'effetto di CLP e α-ch su (A) siero ALT, (B) siero AST e (C) analisi del punteggio di danno epatico.I dati sono stati normalizzati alla media del gruppo Sham.I dati sono stati analizzati con ANOVA unidirezionale seguito dal test di Tukey per confronti multipli, n = 6 per tutti i gruppi.#Significativamente diverso rispetto a sham (p < 0,05).*Significativamente diverso rispetto a CLP (p < 0,05).(D) Il trattamento con α-ch ha ridotto le lesioni istopatologiche indotte dalla sepsi nel fegato di ratto (colorazione H&E, ingrandimento originale × 200 per i, ii e iii e × 400 per iv, v e vi).Il gruppo fittizio non ha mostrato segni di infortunio.Il gruppo CLP ha mostrato una degenerazione vacuolare da lieve a moderata (freccia bianca) e sinusoidi epatici congestionati e dilatati (punta di freccia bianca).Sono mostrati il ​​nucleo di forma triangolare o ovale di prominente cellula di Kupffer (freccia nera) e gruppi di linfociti e macrofagi (infiltrati) (punta di freccia nera).L'effetto protettivo di α-ch era evidente sotto forma di vena centrale non congestionata con corde epatocitarie disposte perifericamente (freccia).Sono stati osservati anche spazi sinusoidali non congestionati con regioni focali non necrotiche o infiltrati infiammatori (punta di freccia).Abbreviazioni: CLP, Legatura cecale e puntura;α-ch, alfa-chimotripsina.Le sezioni epatiche colorate con H&E nella Figura 3D mostrano che il gruppo fittizio mostrava una vena centrale non congestionata e cordoni di epatociti normalmente disposti.Nel gruppo CLP, la vena centrale era dilatata e congestionata.Era circondato da cordoni epatocitari disposti perifericamente con un debole citoplasma eosinofilo e un nucleo basofilo centrale (degenerazione vacuolare da lieve a moderata).Le sinusoidi epatiche erano dilatate e congestionate, al contrario delle normali sinusoidi osservate nel gruppo fittizio.Sono stati osservati anche gruppi di linfociti e macrofagi.È stata notata la prominenza delle cellule di Kupffer con nuclei di forma da ovale a triangolare.L'effetto protettivo di α-ch era evidente dalla presenza di vena centrale non congestionata e spazi sinusoidali.Sono stati osservati epatociti disposti perifericamente con citoplasma eosinofilo e un nucleo centrale senza vacuoli grassi o gonfiore.Non sono state osservate regioni focali necrotiche né infiltrati infiammatori.I punteggi sierici di CR, BUN, cistatina C sierica e danno renale sono notevolmente aumentati nel gruppo CLP rispetto agli animali sottoposti a simulazione.Il trattamento con α-ch ha ridotto significativamente tali livelli e punteggi (Figura 4A-D).Figura 4 Effetto protettivo dell'alfa-chimotripsina contro l'AKI indotto dalla sepsi.Grafici a barre che mostrano l'effetto di CLP e α-ch su (A), siero CR, (B) BUN, (C) cistatina sierica C e (D) punteggio di danno renale.I dati sono stati normalizzati alla media del gruppo Sham.I dati sono stati analizzati con ANOVA unidirezionale seguito dal test di Tukey per confronti multipli, n = 6 per tutti i gruppi.#Significativamente diverso rispetto a sham (p < 0,05).*Significativamente diverso rispetto a CLP (p < 0,05).(E) La somministrazione di α-ch ha ridotto le lesioni istopatologiche indotte dalla sepsi nei reni dei ratti trattati (colorazione H&E, ingrandimento originale × 200 per i, ii e iii e × 400 per iv, v e vi).Il gruppo fittizio non ha mostrato segni di infortunio.Nel gruppo CLP, sono mostrati gli spazi di Bowman da stretti a obliterati con proliferazione delle cellule mesangiali e capillare glomerulare congestionato e fibroso (freccia bianca).Sono stati osservati edema tubulare, aree focali di danno tubulare, calchi intratubulari (punta di freccia) e tessuto interstiziale (freccia nera).Viene illustrato l'edema tissutale sotto forma di aggregati linfocitari (freccia nera).L'effetto protettivo di α-ch era sotto forma di normale struttura del glomerulo (freccia) e di normali strutture tubolari (testa di freccia).Abbreviazioni: CLP, Legatura cecale e puntura;α-ch, alfa-chimotripsina.Figura 4 Effetto protettivo dell'alfa-chimotripsina contro l'AKI indotto dalla sepsi.Grafici a barre che mostrano l'effetto di CLP e α-ch su (A), siero CR, (B) BUN, (C) cistatina sierica C e (D) punteggio di danno renale.I dati sono stati normalizzati alla media del gruppo Sham.I dati sono stati analizzati con ANOVA unidirezionale seguito dal test di Tukey per confronti multipli, n = 6 per tutti i gruppi.#Significativamente diverso rispetto a sham (p < 0,05).*Significativamente diverso rispetto a CLP (p < 0,05).(E) La somministrazione di α-ch ha ridotto le lesioni istopatologiche indotte dalla sepsi nei reni dei ratti trattati (colorazione H&E, ingrandimento originale × 200 per i, ii e iii e × 400 per iv, v e vi).Tutti i diritti riservati.